2021-03-16
真菌毒素是真菌在食品或饲料里生长所产生的代谢产物，对人类和动物都有害。中药材从种植、采集、制备、加工、储藏、流通的全过程周期较长且复杂，如条件控制不当，各环节均可能产生真菌毒素。研究发现，中药材可被多种真菌侵染，产生的毒素包括多种真菌毒素，如黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、伏马菌素和玉米赤霉烯酮等。因此，全方位加强中药材中真菌毒素污染水平监控成为 2020 版《中国药典》的重中之重。
2020 版《中国药典》四部 2351 真菌毒素测定法，按照真菌毒素种类（黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2、赭曲霉毒素 A、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、展青霉素、伏马毒素 B1、B2 及 T-2 毒素）分别制定了相应的供试品前处理方法及净化步骤，增添了多种真菌毒素测定法。迪马科技根据2351通则要求，整理出对应产品配置方案，从标准品、样品前处理产品、色谱分析色谱柱、通用消耗品等方面为您进行中药材中真菌毒素检测提供全面技术支持。
―、黄曲霉毒素测定法
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真菌毒素 |
产品描述 |
货号 |
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标准品 |
黄曲霉毒素B1 [1162-65-8] |
2 μg/mL 乙腈 1 mL |
DRE-A10047100AL-2 |
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黄曲霉毒素B2 [7220-81-7] |
0.5 μg/mL 乙腈 1 mL |
DRE-A10047200AL-0.5 |
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黄曲霉毒素G1 [1165-39-5] |
2 μg/mL 乙腈 1 mL |
DRE-A10047400AL-2 |
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黄曲霉毒素G2 [7241-98-7] |
0.5 μg/mL 乙腈 1 mL |
DRE-A10047500AL-0.5 |
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样品前处理 |
黄曲霉毒素总量免疫亲和柱 |
ProElut AFB&G IAC 3 mL 20/pk |
67104 |
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色谱分析 |
第一法(液相色谱法)
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Diamonsil C18(2) 150 x 4.6 mm, 5 μm |
99601 |
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第二法(液相色谱-串联质谱法) |
Leapsil C18 100 x 2.1mm, 2.7 μm |
86005 |
二、赭曲霉毒素A测定法
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真菌毒素 |
产品描述 |
货号 |
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标准品 |
赭曲霉毒素A [303-47-9] |
10 μg/mL 乙腈 1 mL |
DRE-A15670000AL-10 |
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样品前处理 |
赭曲霉毒素A免疫亲和柱 |
ProElut OTA IAC 3 mL 20/pk |
67112 |
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色谱分析 |
第一法(液相色谱法) |
Diamonsil C18(2) 150 x 4.6 mm, 5 μm |
99601 |
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第二法(液相色谱-串联质谱法) |
Diamonsil C18(2) 150 x 2.1 mm, 3 μm |
99613 |
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Inspire C18 150 x 2.1 mm, 3 μm |
81013 |
三、玉米赤霉烯酮测定法
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真菌毒素 |
产品描述 |
货号 |
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标准品 |
玉米赤霉烯酮[17924-92-4] |
100 μg/mL 乙腈 1 mL |
DRE-A17947400AL-100 |
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样品前处理 |
玉米赤霉烯酮免疫亲和柱 |
ProElut ZEA IAC 3 mL 20/pk |
67110 |
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色谱分析 |
第一法(液相色谱法) |
Diamonsil C18(2) 150 x 4.6 mm, 5 μm |
99601 |
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第二法（液相色谱-串联质谱法） |
Diamonsil C18(2) 150 x 2.1 mm, 3 μm |
99613 |
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Inspire C18 150 x 2.1 mm, 3 μm |
81013 |
四、呕吐毒素测定法
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真菌毒素 |
产品描述 |
货号 |
|
标准品 |
呕吐毒素[51481-10-8] |
100 μg/mL 乙腈 1 mL |
DRE-A12147000AL-100 |
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样品前处理 |
呕吐毒素免疫亲和柱 |
ProElut DON IAC 3 mL 20/pk |
67100 |
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色谱分析 |
第一法(液相色谱法) |
Diamonsil C18(2) 150 x 4.6 mm, 5 μm |
99601 |
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第二法(液相色谱-串联质谱法) |
Diamonsil C18(2) 150 x 2.1 mm, 3 μm |
99613 |
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Inspire C18 150 x 2.1 mm, 3 μm |
81013 |
五、展青霉素测定法
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真菌毒素 |
产品描述 |
货号 |
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标准品 |
展青霉素[149-29-1] |
100 μg/mL 乙腈 1 mL |
DRE-A15896000AL-100 |
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样品前处理 |
展青霉素多功能净化柱 |
ProElut PAT MFC 5 mL 25/pk |
67120 |
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色谱分析 |
液相色谱-串联质谱法 |
Diamonsil C18(2) 150 x 2.1 mm, 3 μm |
99613 |
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Inspire C18 150 x 2.1 mm, 3 μm |
81013 |
六、多种真菌毒素测定法
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真菌毒素 |
产品描述 |
货号 |
|
标准品 |
黄曲霉毒素B1 [1162-65-8] |
2 μg/mL 乙腈 1 mL |
DRE-A10047100AL-2 |
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黄曲霉毒素B2 [7220-81-7] |
0.5 μg/mL 乙腈 1 mL |
DRE-A10047200AL-0.5 |
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黄曲霉毒素G1 [1165-39-5] |
2 μg/mL 乙腈 1 mL |
DRE-A10047400AL-2 |
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黄曲霉毒素G2 [7241-98-7] |
0.5 μg/mL 乙腈 1 mL |
DRE-A10047500AL-0.5 |
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伏马毒素B1[116355-83-0] |
50 μg/mL 乙腈: 水(1:1) 1 mL |
DRE-A13955900WL-50 |
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伏马毒素B2[116355-84-1] |
50 μg/mL 乙腈: 水(1:1) 1 mL |
DRE-A13955905WL-50 |
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T-2 毒素[21259-20-1] |
100 μg/mL 乙腈 1 mL |
DRE-A13989000AL-100 |
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赭曲霉毒素A [303-47-9] |
10 μg/mL 乙腈 1 mL |
DRE-A15670000AL-10 |
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呕吐毒素[51481-10-8] |
100 μg/mL 乙腈 1 mL |
DRE-A12147000AL-100 |
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玉米赤霉烯酮[17924-92-4] |
100 μg/mL 乙腈 1 mL |
DRE-A17947400AL-100 |
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样品前处理 |
HLB柱 |
ProElut PLS 60mg / 3mL 50/pk |
68003 |
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色谱分析 |
液相色谱-串联质谱法 |
Diamonsil C18(2) 150 x 2.1 mm, 3 μm |
99613 |
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Inspire C18 150 x 2.1 mm, 3 μm |
81013 |
通用消耗品
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名称 |
规格 |
货号 |
|
HPLC溶剂缓冲盐 |
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甲醇 HPLC级 |
4 L |
50102 |
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乙腈 HPLC级 |
4 L |
50101 |
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甲酸 HPLC级 |
50 mL |
50144 |
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乙酸 HPLC级 |
50 mL |
50132 |
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通用色谱产品 |
||
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FitMax针头式过滤器 PTFE |
13 mm, 0.22 μm 100/pk |
30043 |
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FitMax针头式过滤器 Nylon |
13 mm, 0.22 μm 100/pk |
30039 |
|
样品瓶（棕色/螺纹） |
2 mL, 100/pk |
1034 |
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样品瓶盖/含垫（已经组装） |
100/pk |
1035 |
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瓶架/白色/蓝色 |
50孔 |
52401A/52401B |
|
HPLC 进样针 |
25 μL |
H80465 |
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GC 进样针 |
5 μL |
H87900 |
红色货号产品促销ing……
陈皮中的黄曲霉毒素总量的测定
适用范围
适用于陈皮中的黄曲霉毒素总量的检测。
样品前处理
准确称取5.00 g样品到50 mL离心管，添加1 g氯化钠，量取25 mL 70%甲醇水溶液，混匀振荡3 min，4000 r/min离心，移取上清液10 mL至另一试管中，加入3 mL正己烷，旋涡混匀3 min，4000 r/min离心，去除上层正己烷与两相处的杂质，取下层提取液5 mL，加入20 mL PBS*溶液进行稀释，稀释混匀后，稀释液用玻璃纤维滤纸过滤，取滤液25 mL (1 g)过黄曲霉毒素总量免疫亲和柱 ProElut AFB&G IAC 3 mL(Cat.# 67104)，溶液以1-2 滴/秒过柱，过完后，加入10 mL PBST**溶液洗柱，再加入10 mL一级水进行洗柱，清除柱子残留水滴(用气体缓吹或轻轻甩干，勿用气流倒吸柱子)，用1 mL甲醇洗脱，0.45 μm滤头过滤，待测。
*PBS溶液: 0.62 g磷酸二氢钠，5.73 g磷酸氢二钠，9 g氯化钠，1000 mL一级水定容；
**PBST溶液: 0.31 g磷酸二氢钠，2.87 g磷酸氢二钠，9 g氯化钠，1000 mL一级水定容，加入0.5 mL吐温20达到0.05%。
色谱条件
色谱柱：Diamonsil C18(2), 150 x 4.6 mm, 5 μm(Cat.# 99601)
流动相：45%甲醇水溶液
流 速：1.0 mL/min
柱温度：35 ℃
进样量：20 μL
检测器：荧光检测器，激发波长360 nm，发射波长440 nm
衍生器：光化学柱后衍生器
添加回收结果
|
样品 |
检测结果(μg/kg) |
回收率(%) |
|
陈皮 |
4.18 |
88.7 |
|
陈皮(添加10 μg/kg) |
13.05 |
免疫亲和层析净化高效液相色谱法检测中药薏苡仁中的玉米赤霉烯酮
适用范围
适用于中药薏苡仁中的玉米赤霉烯酮的检测。
样品提取
称取2份各2.0000 g 样品(误差小于0.001) 到50 mL 离心管，加入0.4 g 氯化钠，其中1 份加标100 ppb，量取10 mL 90%乙腈水溶液，超声提取30 min，剧烈震荡10 min，4000 r/min 离心5 min，取上清液用PBS 稀释5倍，玻璃纤维滤纸过滤，置滤液于50 mL 离心管中待用。
样品净化
取滤液25 mL（1 g），以1 秒/滴的流速分别通过免疫亲和柱ProElut ZEA IAC 3 mL(Cat.No: 67110)，直至空气进入免疫亲和柱中，用10 mL 水淋洗免疫亲和柱，弃去全部滤液，吹干柱子。准确加入1 mL 甲醇到免疫亲和柱进行洗脱，流速约为1 滴/秒，收集全部洗脱液到干净的试管中50 ℃氮气吹干，流动相复溶，过0.45 μm 滤膜，待检测。
* PBS：1.2 g 磷酸氢二钠（或2.92 g 十二水合磷酸氢二钠），8 g 氯化钠，0.2 g 磷酸二氢钾，0.2 g 氯化钾，1000 mL 一级水定容，混匀；
色谱条件
色谱柱：Diamonsil C18(2), 150 x 4.6 mm, 5 μm (Cat.No.: 99601)
流动相：甲醇:乙腈:水= 8:46:46
流速：1.0 mL/min
柱温：35 ℃
进样量： 20 μL
检测波长：激发波长274 nm 发射波长440 nm
标准品谱图
|
峰号 |
化合物名称 |
保留时间(min) |
峰面积 |
峰高 |
浓度(ng/mL) |
|
1 |
玉米赤霉烯酮 |
8.051 |
144524 |
10083 |
1000.00 |
|
总计 |
|
|
144524 |
10083 |
|
薏苡仁样品谱图
|
峰号 |
化合物名称 |
保留时间(min) |
峰面积 |
峰高 |
浓度(ng/mL) |
|
1 |
— |
1.440 |
205163 |
25195 |
0.000 |
|
2 |
玉米赤霉烯酮 |
8.030 |
5224 |
375 |
36.146 |
|
总计 |
|
|
210387 |
25571 |
|
薏苡仁样品添加100 ppb 谱图
|
峰号 |
化合物名称 |
保留时间(min) |
峰面积 |
峰高 |
浓度(ng/mL) |
|
1 |
— |
1.451 |
91646 |
12962 |
0.000 |
|
2 |
玉米赤霉烯酮 |
8.017 |
19792 |
1456 |
136.945 |
|
总计 |
|
|
111438 |
14418 |
|
添加回收结果
|
样品 |
检测结果(μg/mL) |
回收率(%) |
|
薏苡仁样品 |
36.146 |
/ |
|
薏苡仁添加(100 ppb) |
136.945 |
101 |
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