合成着色剂因其色彩亮丽、性质稳定、价格低廉，成为食品工业常用的添加剂之一。它们通常是以苯、甲苯、萘等化工原料合成，长期食用对人体健康具有一定的毒性，尤其是对少年儿童。我国对食品中添加合成着色剂有严格的限制，GB 2760-2014《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》中收载的合成着色剂有11种，分别为柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、喹啉黄、赤藓红和酸性红，并对其允许使用的食品类型和使用限量做出了明确规定。

本方案适用于果粒橙、果冻、乳饮料、糕点、火腿和茶叶中柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、喹啉黄、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红、亮蓝和赤藓红11种合成着色剂的测定，定量限为3.0mg/kg。

(1)单标储备液1000μg/mL，称取适量色素单标，用水配制成1000μg/mL的单标储备液。

(2)混标中间液50μg/mL，分别吸取0.5mL单标储备液1000μg/mL于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，配制成50μg/mL的混标中间液。

3.1 液体及部分固体试样(果粒橙、果冻、乳饮料)

(1)取2.0g样品，加入25mL乙醇氨水溶液，涡旋1min，50℃水浴超声提取20min，8000rpm下离心5min，收集上清液于50mL容量瓶中；

(2)向下层残留物中加入15mL乙醇氨水溶液，按照步骤(1)重复提取一次，合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至刻度；

(3)准确吸取10mL提取液，50℃水浴下氮气吹至1mL左右，分2-3次共加入10mL 5%甲醇水溶液溶解，待净化。

3.2 含油量较大的试样(糕点、火腿)

(1)取2.0g样品，加入20mL石油醚，涡旋1min，振荡10min，8000rpm离心5min，弃去上清液，除尽石油醚溶剂，加入25mL乙醇氨水溶液，涡旋1min，50℃水浴超声提取20min，8000rpm下离心5min，收集上清液于50mL容量瓶中；

(2)向下层残留物中加入15mL乙醇氨水溶液，按照步骤(1)重复提取一次，合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至刻度；

(3)准确吸取10mL提取液，50℃水浴下氮气吹至1mL左右，分2-3次共加入10mL5%甲醇水溶液溶解，待净化。

3.3 干性固体试样(茶叶)

(1)取2.0g样品，加入2mL水，混匀，加入25mL乙醇氨水溶液，涡旋1min，50℃水浴超声提取20min，8000rpm下离心5min，收集上清液于50mL容量瓶中；

(2)向下层残留物中加入15mL乙醇氨水溶液，按照步骤(1)重复提取一次，合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至刻度；

(3)准确吸取10mL提取液，50℃水浴下氮气吹至1mL左右，分2-3次共加入10mL 5%甲醇水溶液溶解，待净化。

【备注】乙醇氨水溶液：700mL无水乙醇，4mL氨水，用水定容至1000mL。

ProElut PWA-2 150mg/6mL(Cat.# 65815)

(1)活化：依次加入6mL甲醇、6mL水，流出液弃去； 

(2)上样：将待净化液加入柱中，流出液弃去； 

(3)淋洗：依次加入6mL 2%甲酸水溶液、6mL甲醇，流出液弃去； 

(4)洗脱：加入6mL 2%氨水甲醇溶液，控制流速低于1mL/min，收集洗脱液； 

(5)重新溶解：将洗脱液在50℃下氮气吹至0.5mL，用乙酸铵（20mM，pH9.0）定容至2mL，涡旋混匀，上机分析。 

色谱柱：Diamonsil C18(2)  250x4.6mm，5μm（Cat.#：99603）

流速：1.0mL/min    

进样量：10μL   柱温：35℃

检测器：PDA 400-800nm

流动相：A：乙腈    B：0.02mol/L乙酸铵溶液

梯度设置

食品中人工合成着色剂的HPLC检测的添加回收结果。

添加浓度30mg/kg（加标量：50μg/mL，1.2mL）

添加浓度3.0mg/kg（加标量：50μg/mL，0.12mL）

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