本方案适用食品中牛乳铁蛋白的测定。

(1) 磷酸盐缓冲液Ⅰ：称取 30.08g十二水合磷酸氢二钠，2.50g二水合磷酸二氢钠，加入800mL去离子水溶解，再加入20mL乳铁蛋白提取剂^*，用纯水定容至1L，混匀。

(2) 磷酸盐缓冲液Ⅱ：称取15.04g十二水合磷酸氢二钠，1.25g二水合磷酸二氢钠，5.84g氯化钠，加适量水溶解，定容至1L，混匀。

(3) 洗脱溶液：称取7.1g十二水合磷酸氢二钠，58.4g氯化钠，用适量水溶解，并定容至1L。 

*乳铁蛋白提取剂随货(肝素免疫亲和柱ProElut^® HP IAC)附赠，可有效增加提取效率和净化效率。

称取5g样品到50mL离心管中，加入25mL磷酸盐缓冲液Ⅰ，漩涡振荡5min，然后在4℃，10000r/min条件下离心15min，去除上层奶脂用大量程移液器取出中间层10mL作为上样液待净化。

ProElut^® HP IAC 6mL 20/pk (Cat.#: 67117)

(1)活化：将10mL注射器连接于亲和柱上端，放掉柱管保护液，取5mL磷酸盐缓冲液Ⅱ活化亲和柱；

(2)上样：取提取样液10mL过柱净化(控制流速1-3mL/min)，弃去流出液；

(3)淋洗：溶液全部过柱后，加入10mL磷酸盐缓冲溶液Ⅱ淋洗，甩干柱内水分；

(4)洗脱：加入4mL洗脱溶液进行洗脱并收集，洗脱液混匀过0.22μm水系滤膜，待液相色谱检测。

色谱柱：Bio-Bond^® 5μm C4, 250x4.6mm (Cat.#: 84406)

流速：1.0mL/min    

进样量：50μL

柱温：30℃

检测器：PDA 280nm

流动相：A:乙腈   B:0.1%三氟乙酸水溶液

梯度设置：

(1) 肝素亲和柱随货附赠了乳铁蛋白提取剂，有效增加了提取效率和净化效率。

(2) 液体牛奶样品在50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg添加浓度水平上的回收率均大于85%，回收验证合格。