本方案适用于果粒橙、果冻、火腿、酸奶、棒棒糖、黑巧克力和调制乳粉等样品中胭脂虫红的测定。

本方法的定量限为：当称样量为2g时，液体及半固体试样（含乳半固体除外）中胭脂虫红（以胭脂红酸计）定量限为0.02g/kg，固体及含乳半固体试样（调制乳粉除外）中胭脂虫红（以胭脂红酸计）定量限为0.04g/kg，调制乳粉中胭脂虫红（以胭脂红酸计）定量限为0.1g/kg。

(1) 标准储备液(1.0mg/mL)(Cat.#:48204)：准确称取10.0mg标准品，用水溶解，并定容至10mL容量瓶中，摇匀。

(2) 标准系列工作液：分别准确吸取标准储备液(1.0mg/mL):0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL于10mL容量瓶中，用0.1%磷酸水溶液定容至刻度，摇匀，配制成质量浓度分别为5.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L和100mg/L标准系列工作液。

3.1 液体及半固体试样(含乳半固体除外)

称取2g试样于50mL离心管中，加入40mL盐酸溶液(2.0mol/L)，摇匀，置于沸水浴中加热30min，取出冷却至室温后，振荡5min，超声5min，5000rpm离心5min，上清液转移至50mL容量瓶中，用水定容至刻度，经适量脱脂棉过滤，待净化。

3.2 固体及含乳半固体试样(调制乳粉除外)

称取2g试样于50mL离心管中，加入40mL盐酸溶液(2.0mol/L)，摇匀，置于沸水浴中加热30min，取出冷却至室温后，振荡5min，超声5min，5000rpm离心5min，上清液转移至100mL容量瓶中，残渣加入40mL盐酸溶液(2.0mol/L)，常温条件下，重复提取一次，合并两次提取液，用水定容至刻度，经适量脱脂棉过滤，待净化。

3.3 调制乳粉

称取2g试样于50mL离心管中，加入40mL盐酸溶液(2.0mol/L)，摇匀，置于沸水浴中加热30min，取出冷却至室温后，振荡5min，超声5min，5000rpm离心5min，上清液转移至250mL容量瓶中，残渣加入40mL盐酸溶液(2.0mol/L)，常温条件下，重复提取两次，合并三次提取液，用水定容至刻度，经适量脱脂棉过滤，待净化。

ProElut^® PXA 150mg/6mL（Cat.#:68304）

(1)活化：依次加入6mL甲醇、6mL水，弃去流出液；

(2)上样：将25mL待净化液加入柱中，弃去流出液；

(3)淋洗：依次加入12mL水、6mL甲醇，弃去流出液，真空抽至柱体近干；

(4)洗脱：加入6mL 2%磷酸甲醇溶液，收集洗脱液；

(5)重新溶解：将洗脱液在40℃水浴下氮气吹至近干，用0.1%磷酸水溶液定容至2mL，涡旋混匀，8000rpm离心5min，取清液上机分析。

色谱柱：Diamonsil^® Plus C18 150x4.6mm,5μm（Cat.#:99401）

流  速：1.2mL/min    

进样量：10μL

柱  温：40℃

检测器：PDA 494nm

流动相：A:0.1%磷酸水溶液 B:0.1%磷酸乙腈溶液

梯度设置:

食品中胭脂虫红的HPLC检测的添加回收结果。