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话梅、鸡腿及火腿中人工合成着色剂的检测——SPE/HPLC法解决方案

2018-01-19

参考标准:GB 5009.35-2016 食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定、GB 2760-2014 食品安全国家标准 食品添加剂使用标准


        《GB 2760-2014 食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》对蜜饯和肉制品中准许使用的人工合成色素有严格规定,但很多蜜饯和肉制品生产厂家为了颜色鲜艳,仍然违规添加部分合成色素。蜜饯和肉制品类样品基质复杂,色素提取净化过程麻烦,因此建立蜜饯和肉制品中简便、快速的合成色素多组分检测方法非常有必要。


方法优势
        对比国标《GB 5009.35-2016 食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》,迪马科技技术实验室开发的《话梅、鸡腿及肉肠中人工合成着色剂的检测》方法:
(1) 采用乙醇、乙腈和水提取,ProElut PWA-2固相萃取柱净化,HPLC-PDA检测;
(2) 具有提取方法简单、回收率高、净化效果优异、方法稳定性好等优点;
(3) 方法检出限:亮蓝是1.0 mg/kg,其他着色剂是0.2 mg/kg,与国标一致。


话梅、鸡腿及火腿中人工合成着色剂的检测——SPE/HPLC法


1、适用范围
        本方案适用于话梅、鸡腿及火腿(肉肠)中柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、酸性红、诱惑红、亮蓝和赤藓红等10种人工合成着色剂的检测,方法检出限:亮蓝是1.0 mg/kg,其他的着色剂是0.2 mg/kg。

 

2、标准品配制
(1) 单标储备液1000 μg/mL,称取适量色素单标,用10%甲醇水配制成1000 μg/mL的单标储备液。
(2) 混标中间液100.0 μg/mL,吸取适量储备液单标1000 μg/mL,用10%甲醇水配制成100 μg/mL的混标中间液。

 

3、提取
3.1 话梅
(1) 取1.0 g话梅,加入5 mL提取液A*,于70 ℃水浴超声振荡10 min使其分散,再加15 mL提取液A*振荡2 min,70 ℃水浴超声提取10 min,6000 rpm下离心2 min,收集上清液;
(2) 取下层残留物,加入20 mL提取液A*,振荡2 min,70 ℃水浴超声提取15 min,6000 rpm下离心
2 min,收集上清液;
(3) 再向下层残留物,加入20 mL提取液A*按(2)重复提取一次,合并三次上清液;
(4) 在35 ℃水浴条件下,减压蒸至约18 mL,再加入3 mL甲酸混匀,待净化。

 

3.2 鸡腿、火腿(肉肠)
(1) 1.0 g样品,加入1 g C18,加入20 mL提取液A*,振荡2 min,60 ℃水浴超声提取10 min,6000 rpm下离心2 min,收集上清液;
(2) 取下层残留物,加入10 mL提取液A*,振荡2 min,60 ℃水浴超声提取15 min,6000 rpm下离心
2 min,收集上清液;
(3) 再向下层残留物中,加入10 mL提取液A*按(2)重复提取一次,合并三次上清液;
(4) 在35 ℃水浴条件下,减压蒸至约12 mL,再加入3 mL甲酸混匀,待净化。

*提取液A:取100 mL乙醇和50 mL乙腈,混匀,取140 mL乙醇:乙腈(2:1)混合溶液,加入60 mL水和2 mL氨水,混匀。

 

4、净化—— ProElut PWA-2 150 mg/6 mL(Cat.# 65815)
(1)活    化: 依次用5 mL甲醇、5 mL 10%甲酸水,流出液弃去;
(2)上    样: 将上样液加入柱中,流出液弃去;
(3)淋    洗: 依次用5 mL水、5 mL甲醇淋洗,流出液弃去;
(4)洗    脱: 6 mL 15%氨水甲醇洗脱,收集洗脱液;
(5)定    容: 将洗脱液在50 ℃下氮吹至约300 μL,用流动相定容至1 mL,上机分析。

 

5、色谱条件
色谱柱:Inspire C18,250 mm × 4.6 mm,5 μm(Cat.# 81006)
流  速:1.0 mL/min   
进样量:20 μL  
柱  温:35 ℃
检测器:PDA 254 nm
流动相:A:乙腈   B:0.02 mol/L乙酸铵溶液
梯度设置

时间(min)

0

12

16

18

23

A(%)

5

30

37

5

5

B(%)

95

70

63

95

95

 

6、添加回收结果


表1  食品中人工合成着色剂检测的添加回收结果 (%)


 

注:
*回收率:个别有干扰的目标峰用最大吸收波长积分;
*柠檬黄:话梅类样品做柠檬黄时,回收率重现性不好。

 

表2  样品空白含量(mg/kg)



人工合成着色剂标准品(10 mg/L)检测的液相色谱图



人工合成着色剂标准品(1 mg/L)检测的液相色谱图



话梅(添加水平为10 mg/kg)中人工合成着色剂检测的液相色谱图


  
话梅(添加水平为1 mg/kg)中人工合成着色剂检测的液相色谱图



话梅(空白样品)中人工合成着色剂检测的液相色谱图



鸡腿(添加水平为10 mg/kg)中人工合成着色剂检测的液相色谱图



鸡腿(添加水平为1 mg/kg)中人工合成着色剂检测的液相色谱图


鸡腿(空白样品)中人工合成着色剂检测的液相色谱图



火腿(添加水平为10 mg/kg)中人工合成着色剂检测的液相色谱图



火腿(添加水平为1 mg/kg)中人工合成着色剂检测的液相色谱图


火腿(空白样品)中人工合成着色剂检测的液相色谱图

 

话梅、鸡腿及火腿中人工合成着色剂的检测——SPE/HPLC法相关产品信息

货号

名称

规格

样品前处理

65815

ProElut PWA-2

150 mg/6 mL 30/pk

244358

12管防交叉污染真空SPE萃取装置

12位

4803

1,3,6 mL柱管通用连接器

15/pk

4806

考克(控制流量)

15/pk

99011

真空/正压两用泵,无油

1/pk

99013

抽滤瓶套装

(包括硅橡胶管2米, 2 L抽滤瓶及橡胶塞)

1/pk

30039

FitMax针头式过滤器 Nylon

13 mm, 0.22 μm 100/pk

30040

FitMax针头式过滤器 Nylon

13 mm, 0.45 μm 100/pk

色谱柱及保护柱

81006

Inspire C18反相色谱柱

250 x 4.6 mm,5 μm

6603

Inspire C18保护柱柱芯

5 μm, 10 x 4.0 mm, 2/pk

6220

EasyGuard 保护柱柱套

10 mm

标准品

12-NG-BS31-1G

柠檬黄[1934-21-0]

1 g

50P-C15506000

新红[220658-76-4]

0.1 g

12-NG-BS132-1G

苋菜红[915-67-3]

1 g

12-NG-BS93-1G

靛蓝[860-22-0]

1 g

12-NG-BS133-1G

胭脂红[2611-82-7]

1 g

82B-DYE-024S

日落黄[2783-94-0]

100 μg/mL 溶于甲醇 1 mL

83A-A965140-1G

酸性红[3567-69-9]

1 g

82B-DYE-056N

诱惑红[25956-17-6]

0.1 g

12-NG-BS113-1G

亮蓝[3844-45-9]

1 g

12-NG-BS69-1G

赤藓红[16423-68-0]

1 g

HPLC溶剂Ÿ缓冲盐Ÿ离子对试剂

50102

甲醇 HPLC级

4 L

50101

乙腈 HPLC级

4 L

50108

乙醇 HPLC级

4 L

50144

甲酸 HPLC级

50 mL

50138

乙酸铵HPLC级

100 g

通用色谱产品

52401B

瓶架/蓝色

50孔

52401A

瓶架/白色

50孔

1034

样品瓶(棕色/螺纹)

2 mL, 100/pk

1035

样品瓶盖/含垫(已经组装)

100/pk

H80465

HPLC 进样针

25 μL

红色产品货号#30039、#30040、#1034、#1035火热促销中
 

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